牛谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)ELISA試劑盒

間接ELISA：本法主要用于檢測。（DVH）的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標抗、陰性及陽性DVH參考；待檢鴨；③ ELISA檢測儀、加樣器、聚微量板。⑵ 步驟① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干③ 加酶標 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。⑶ 結(jié)果判定　已知陽性與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽性的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且待檢的OD值≥0.4，則判為陽性，否則判為陰性。

牛谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)ELISA試劑盒

免責聲明：試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

試劑盒操作步驟：

   實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設空白孔、孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。 為實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的品溶液。

2.棄去，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記工作液 100μl（取1μl生物素標記加99μl生物素標記稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時可見品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

標本的采集及保存：

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  ：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
  

  
  


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  ：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
  

  
  


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  細胞物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。)
  

  
  


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  標本的稀釋原則：通過文獻檢索的了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。
  

  
  


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  品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
  

  
  


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  生物素標記的稀釋原則：臨用前以生物素標記稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記加990μl生物素標記稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用小時內(nèi)配制。
  

  
  


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  辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用小時內(nèi)配置
  

  
  

ELISA：本法主要用于檢測IgM。由于IgM出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種的早期診斷。ELISA根據(jù)所用標記不同可分為標記抗原、標記、標記抗ELISA等幾種，其中以標記抗原ELISA比較有代表性，該的主要程序為：① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

實驗結(jié)果計算：

    以物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出曲線，根據(jù)樣品的OD值由曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用物的濃度與OD值計算出曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

注意事項：

1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

2.洗滌非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3.一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，建議使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做曲線，做復孔。

5.如標本中待測含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請乘以稀釋倍數(shù)。

6.在配制品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

7.底物請避光保存。

8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

試劑盒性能

1．準確性：品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2．靈敏度檢測濃度小于10 pg/ml。

3．特：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4．重復性：批內(nèi)與批見應分別小于9%和15%。

主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA檢測試劑盒,標準品,生化試劑

上海篤瑪生物科技有限公司是一家從事生物學試劑及試劑盒的生物企業(yè)。 總部位于上海，并在全國設有經(jīng)銷或代理機構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務確立了“篤瑪生物”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有的研發(fā)和質(zhì)量檢測團隊以及的倉儲和物流系統(tǒng)?！昂V瑪生物”已經(jīng)得到全國科研工作者的認可，成為廣大經(jīng)銷商推崇的品牌。 公司擁有一批的研發(fā)人員，我們專注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠。先后開發(fā)了涵蓋分子生物學、細胞生物學、學、生物醫(yī)學等領域的多種試劑及試劑盒。同時，提供各種常規(guī)生化試劑，庫存常備產(chǎn)品多達10000多種，可隨時為廣大科研工作者提供各類試劑。在質(zhì)量方面，謹記公司信念：質(zhì)量一切。所有研發(fā)的產(chǎn)品都設有嚴謹?shù)纳a(chǎn)流程，科學的質(zhì)量檢測方法和成熟的質(zhì)量檢測程序，我們恪守對每一位用戶的承諾：用的態(tài)度做的品牌。同時，公司組建了一支的技術服務隊伍，能夠為科研工作者提供的技術服務。每一位購買篤瑪生物產(chǎn)品的用戶都能夠得到的咨詢和完善的售后服務。

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