一、計(jì)劃管理
1、制定儀器的使用計(jì)劃，應(yīng)結(jié)合工作任務(wù)、使用人員的技術(shù)水平、安裝能力和條件及資金等情況。

2、購置儀器設(shè)備應(yīng)從實(shí)際出發(fā)，本著使用、節(jié)約的原則，選用質(zhì)量良好，性能穩(wěn)定，能滿足工作要求的儀器設(shè)備。

3、對(duì)貴重儀器設(shè)備的計(jì)劃加強(qiáng)論證。具體使用人員應(yīng)親自到生產(chǎn)廠了解儀器型號(hào)、性能和質(zhì)量指標(biāo)，親自到使用單位了解該儀器有缺點(diǎn)和實(shí)用價(jià)值。然后按規(guī)定寫出內(nèi)部聯(lián)絡(luò)單、采購單。

4、購置計(jì)劃按審批權(quán)限，報(bào)主管領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)方可執(zhí)行。

二、安裝驗(yàn)收
1、儀器設(shè)備到貨后，抓緊安裝驗(yàn)收。如發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)處理。

2、儀器設(shè)備驗(yàn)收完畢后，要填寫收料單和領(lǐng)料單，然后交使用人使用和保管。

3、儀器設(shè)備在保修期內(nèi)要早運(yùn)行、多運(yùn)行，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，及早處理。

三、使用保管
1、建立儀器設(shè)備總帳。

2、計(jì)量檢測的儀器設(shè)備應(yīng)專人管理，制定操作規(guī)程，要有使用、點(diǎn)檢、檢定、維修的記錄。

3、對(duì)貴重精密儀器和計(jì)量檢測儀器檔案內(nèi)容：

3.1儀器設(shè)備資料：合格證、產(chǎn)品樣本、裝箱單、應(yīng)用和維修說明書，線路圖及其它有關(guān)資料。

3.2使用管理資料：操作規(guī)程及保養(yǎng)規(guī)定，使用和維修記錄。

4、儀器設(shè)備的檔案、帳冊(cè)應(yīng)由專人保管，保管人員變動(dòng)時(shí)要認(rèn)真辦理移交手續(xù)，不得丟失。

5、應(yīng)定期檢查儀器設(shè)備的使用情況，出現(xiàn)問題及時(shí)解決。

四、維修保養(yǎng)
1、儀器設(shè)備的維修應(yīng)以預(yù)防為主，做好日常性維護(hù)保養(yǎng)工作。

1.1日常維護(hù)保養(yǎng)的任務(wù)是：

A、制作防塵罩、保持儀器設(shè)備的清潔；

B、每日工作完畢后，應(yīng)對(duì)儀器設(shè)備的易污染點(diǎn)進(jìn)行清潔工作；

C、定期對(duì)儀器設(shè)備的外表及可拆卸部件進(jìn)行清潔工作；

D、儀器設(shè)備的防潮部分，應(yīng)放置干燥劑，并經(jīng)常更換。

1.2儀器設(shè)備維修任務(wù)：

A、定期對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行點(diǎn)檢和按說明書的指導(dǎo)進(jìn)行一般性維護(hù)，必要時(shí)送生產(chǎn)廠檢修。

B、擬訂維修備品、備件的購置計(jì)劃。

C、對(duì)儀器設(shè)備的安全使用情況進(jìn)行檢查。

、設(shè)備簡介

PE EnVision 2105 多標(biāo)記微孔板檢測系統(tǒng)，主要用于在微孔板上進(jìn)行光吸收、化學(xué)發(fā)光、熒光、時(shí)間分辨熒光、AlphaScreen以及熒光偏振等所有非放射性標(biāo)記技術(shù)檢測，具備的靈敏度、穩(wěn)定性、和檢測速度。

、設(shè)備參數(shù)與優(yōu)勢

EnVision多標(biāo)記微孔板檢測儀是目前檢測速度快的高通量檢測儀之一，所有檢測技術(shù)都是模塊化設(shè)計(jì)，用戶可根據(jù)需要自由選取適合的檢測模塊，如以后有新的應(yīng)用需求和通量要求，可以在用戶實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場升級(jí)。作為行業(yè)的產(chǎn)品，在光路設(shè)計(jì)和附件配置方面均有到之處，為用戶提供更靈敏、更快速、更靈活的檢測體驗(yàn)。

1. 標(biāo)記物特異的濾光片/二向色鏡模塊

EnVision多標(biāo)記檢測儀采用濾光片/二向色鏡模塊光路，其優(yōu)勢是把激發(fā)光和發(fā)射光完全分離開，避免了檢測時(shí)的信號(hào)干擾，檢測的準(zhǔn)確性。所有濾光片/二向色鏡均配備條形碼，軟件可自動(dòng)識(shí)別，避免了手動(dòng)選取光學(xué)元件時(shí)出錯(cuò)的可能性。

2. 四光柵檢測光路

激發(fā)和發(fā)射均采用雙光柵技術(shù)，在檢測靈敏度的同時(shí)大大降低背景信號(hào)，可進(jìn)行所用光吸收和熒光檢測。具有全波長掃描功能，可確定待測物質(zhì)的吸收峰值或熒光激發(fā)及發(fā)射峰值；具有很大的檢測靈活性。

EnVision的濾光片/二向色鏡與四光柵混合光路能大限度的兼顧檢測靈敏度和靈活性，并提供快的速度和高通量。

3. 低背景的雙檢測器

EnVision的頂部檢測光路采用全透鏡模式，不借助光導(dǎo)器或是光纖束，檢測速度更快、靈敏度更高。兩個(gè)溫度恒定的紅敏光電倍增管（PMT）檢測器滿足FRET、LANCE、BRET、雙報(bào)告基因等雙發(fā)射同時(shí)檢測分析的要求。

4. 超敏感化學(xué)發(fā)光

采用的檢測器更靠近樣品，立的光路設(shè)計(jì)有效避免相鄰樣本在檢測時(shí)的交叉干擾，僅需更少的細(xì)胞就能獲得比標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)發(fā)光更高的靈敏度，使原代細(xì)胞、干細(xì)胞或難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的檢測也不再困難。



5. 溫度控制

溫度控制覆蓋整板區(qū)域，其范圍是室溫+2℃至50℃，并且在微孔板頂部有一加熱部件，可有效防止冷凝問題。另外有針對(duì)AlphaScreen檢測的溫控模塊，AlphaScreen檢測過程的穩(wěn)定性。
6. AlphaScreen

采用680nm激光源，立光路，立的PMT檢測器，激發(fā)孔的同時(shí)檢測后一孔，大大提高讀板速度，實(shí)現(xiàn)高通量檢測。

、設(shè)備應(yīng)用

蛋白/核酸定量檢測

1. 蛋白質(zhì)定量

Lowrry法——蛋白質(zhì)中含有酚基的酪氨酸，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生藍(lán)色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比，在650nm處檢測吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

Bradford法——蛋白質(zhì)與染料考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合，在一定的線性范圍內(nèi)，反應(yīng)液595nm處吸光度的變化量與反應(yīng)蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進(jìn)行蛋白定量。

BCA法——BCA(bicinchonininc acid)與二價(jià)銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起即成為蘋果綠，即BCA工作試劑。在堿性條件下，BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，蛋白質(zhì)將Cu2+還原為Cu+，一個(gè)Cu+螯合二個(gè)BCA分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復(fù)合物，在562nm處檢測，大光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
2. 核酸定量
PicoGreen染料能特異的與雙鏈DNA（dsDNA）結(jié)合，OliGreen能特異的結(jié)合寡核苷酸（ssDNA）；雙鏈λDNA或核苷酸溶于10 mM Tris-HCl（1 mM EDTA，pH 7.5）緩沖液，分別加入熒光染料，在激發(fā)光485nm、發(fā)射光530nm條件下檢測熒光信號(hào)，核酸濃度和熒光強(qiáng)度成正比。


代謝研究

包括NADH檢測、堿性磷酸酶、蛋白酶活性、雙報(bào)告基因檢測、細(xì)胞色素P450基因表達(dá)等。

1. 堿性磷酸酶檢測

堿性磷酸酶（alkaline phosphatase）廣泛分布于機(jī)體各臟器器官中，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)去除，并生成磷酸根離子和自由的羥基，參與各種生化反應(yīng)。BBTP是一種非熒光物質(zhì)，當(dāng)堿性磷酸酶去除其磷酸基團(tuán)，得到的產(chǎn)物BBT可發(fā)出很強(qiáng)的熒光信號(hào)；因此，BBTP可作為底物檢測堿性磷酸酶活性。檢測靈敏度可達(dá)0.5 pg/孔（3 amol/孔）。

2. 雙報(bào)告基因檢測

報(bào)告基因是用來檢測藥物作用后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達(dá)水平或轉(zhuǎn)錄活性的變化的方法。雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)中，報(bào)告基因表達(dá)活力的相對(duì)改變與偶聯(lián)調(diào)控啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活力的改變相關(guān)，偶聯(lián)到組成型啟動(dòng)子的第二個(gè)報(bào)告基因，提供轉(zhuǎn)錄活力的內(nèi)對(duì)照， 使測試不被實(shí)驗(yàn)條件變化所干擾。本實(shí)驗(yàn)采用螢火蟲熒光素酶，結(jié)合β-半乳糖苷酶（β-Gal）的雙報(bào)告基因系統(tǒng)。先在微孔板中加入20μl樣本溶液，再加入50μl熒光素試劑和50μl ATP，用檢測儀檢測1s，讀取化學(xué)發(fā)光信號(hào)。然后在微孔板中加入100μl β-Gal底物，孵育15min后，于570nm檢測吸光度?；瘜W(xué)發(fā)光信號(hào)值與熒光素酶活性成正比，同時(shí)β-Gal變化趨勢應(yīng)與熒光素酶一致。

細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡方面的研究
包括細(xì)胞活力、氧應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞粘連、鈣離子檢測、CYP介導(dǎo)的藥物代謝、ATP檢測、蛋白質(zhì)羥基化、Caspase-3檢測等。

1. 細(xì)胞活力檢測——MTT法

活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。

2. CYP介導(dǎo)的藥物代謝

細(xì)胞色素P450（CYP）是藥物代謝過程中的關(guān)鍵酶，藥物先導(dǎo)分子能否被CYP酶代謝、哪種CYP參與代謝以及先導(dǎo)分子是否會(huì)抑制CYP的形成，這些問題對(duì)于藥物ADME篩選至關(guān)重要。實(shí)驗(yàn)通過熒光檢測快速篩選能抑制CYP2A5形成的先導(dǎo)分子；從小鼠肝臟微粒體獲取有活性的CYP2A5，香豆素作為底物能特異的被CYP2A5代謝。反應(yīng)開始前在微孔板中加入NADPH，37℃孵育10分鐘，以60μl 10%TCA終止反應(yīng)，再加入140μl甘氨酸-NaOH溶液（pH 10.4）增強(qiáng)熒光信號(hào)，在355nm激發(fā)光和460nm發(fā)射光條件下檢測代謝產(chǎn)物7-OH-香豆素的含量。先導(dǎo)分子對(duì)CYP2A5活性抑制作用越強(qiáng)，則檢測到的熒光信號(hào)越弱。
3. ATP檢測
三磷酸腺苷（ATP）是活細(xì)胞的能量儲(chǔ)存單元，在細(xì)胞中的含量比較穩(wěn)定，因此ATP的數(shù)量與活細(xì)胞數(shù)量有緊密的相關(guān)性。ATP檢測常用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和細(xì)胞粘附研究。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在微孔板中加入25μl樣本和25μl細(xì)胞裂解液，應(yīng)用分液器每孔加入50μl熒光素酶試劑，延遲1s，檢測10s；ATP濃度與化學(xué)發(fā)光信號(hào)成正比，由此推算細(xì)胞活性。
4. Caspase-3檢測
凋亡是在不產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)的情況下，多細(xì)胞生物體清除損傷細(xì)胞的一種方式。半胱氨酸酶被稱為Caspase，在細(xì)胞凋亡初期扮演著重要角色，藥物有可能激活或抑制Caspase的產(chǎn)生。因此，在藥物研發(fā)和癌癥研究中，Caspase及其調(diào)控機(jī)制備受矚目。PerkinElmer公司開發(fā)了一種LANCE方法檢測Caspase-3的活性；其原理是，在Caspase-3的四肽底物一端標(biāo)記Eu，另一端偶聯(lián)能淬滅Eu熒光的基團(tuán)QSY?7，當(dāng)樣本表現(xiàn)Caspase-3活性時(shí)，四肽底物上淬滅基團(tuán)被切除，游離的Eu激發(fā)后發(fā)出熒光，通過熒光強(qiáng)度檢測，可計(jì)算樣本中Caspase-3的含量。此方法無需洗板，快速、靈敏、高信噪比，穩(wěn)定性、重復(fù)性好。

信號(hào)通路、GPCR研究

TR-FRET/LANCE檢測GPCR信號(hào)通路第二信使cAMP：標(biāo)記Eu的cAMP與攜帶ULight的抗體結(jié)合形成共振能量轉(zhuǎn)移對(duì)，當(dāng)內(nèi)源性的cAMP釋放后可以競爭結(jié)合其抗體，從而破壞熒光信號(hào)的傳遞，通過檢測665/615信號(hào)的改變，檢測內(nèi)源cAMP的含量。LANCE檢測方法與傳統(tǒng)ELISA方法相比，均相免洗、操作步驟簡單、具有更高的檢測靈敏度和信噪比。

溫濕度計(jì)計(jì)量檢定時(shí)采用常溫下、蔭涼、冷凍及其凈化車間的溫濕度規(guī)定不一致，以凈化車間應(yīng)用的溫濕度計(jì)為例子，GMP規(guī)定是溫度18℃~26℃、濕度 45%~65%，可是計(jì)量檢定單位計(jì)量檢定的情況下是不容易有所差異的，復(fù)檢的情況下公司能夠向計(jì)量檢定部門建議不一樣應(yīng)用自然環(huán)境的溫濕度重要檢測點(diǎn)關(guān)鍵計(jì)量檢定。

溫濕度計(jì)儀器設(shè)備校準(zhǔn)準(zhǔn)備工作：將規(guī)范器的攝像頭放置恒溫恒濕箱個(gè)人工作室的管理中心部位，被檢儀器設(shè)備放置 恒溫恒濕箱個(gè)人工作室的合理室內(nèi)空間內(nèi)，置放的方法與總數(shù)應(yīng)不危害箱里氣體循環(huán)系統(tǒng)。恒溫恒濕箱的個(gè)人工作室應(yīng)確保密封性，且不可置放濕冷或強(qiáng)吸水性原材料。

1.溫度校準(zhǔn)：溫度示值誤差校準(zhǔn)：校準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)分布均勻在全部檢測范圍上，不可低于三點(diǎn)。校準(zhǔn)箱的溫度做到預(yù)設(shè)值后，應(yīng)再平穩(wěn) 30min 后逐漸讀數(shù)，讀熟規(guī)范器，后讀 被檢儀器設(shè)備，間距 5min 后反復(fù)讀數(shù)一次。取2次讀數(shù)的算數(shù)平均值為規(guī)范器和被檢儀器設(shè)備的溫度量程。

2. 被檢儀器設(shè)備在各校準(zhǔn)點(diǎn)上的溫度示值誤差均應(yīng)合乎本規(guī)程 5.1 的要求。

3. 濕度校準(zhǔn)：濕度示值誤差校準(zhǔn)：按照從低溫干燥到高低溫的次序開展校準(zhǔn)，校準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)分布均勻在全部檢測范圍上（一般先后為 40%RH，60%RH，80%RH），不可低于三點(diǎn)。濕度校準(zhǔn)時(shí)，箱里溫度控制精度在 20℃，恒溫恒濕箱的濕度做到預(yù)設(shè)值后，應(yīng)再平穩(wěn) 30min 后逐漸讀數(shù)，讀熟規(guī)范器，后讀被檢儀器設(shè)備，間距 5min 后反復(fù)讀數(shù)一次。取2次讀數(shù)的 算數(shù)平均值為規(guī)范器和被檢儀器設(shè)備的相對(duì)性濕度量程。

4.被檢儀器設(shè)備在各校準(zhǔn)點(diǎn)上的濕度示值誤差均應(yīng)合乎本規(guī)程 5.1 的要求。

5.溫濕度校準(zhǔn)可另外開展。被校儀器設(shè)備讀數(shù)均以看著方法開展。針對(duì)指南針儀器設(shè)備， 視野應(yīng)垂直平分內(nèi)徑量表。溫濕度計(jì)校準(zhǔn)與計(jì)量檢定，溫濕度校檢結(jié)果都是有一個(gè)誤差指數(shù)，以規(guī)范45％為例子，被檢溫濕度計(jì)測到的結(jié)果可能是43％，也是有可能是47％，自然這兩個(gè)結(jié)果也沒有超出要求的差值范疇，該溫濕度計(jì)全是達(dá)標(biāo)的，可是若沒有考慮到誤差指數(shù)，測到47％的那只溫濕度計(jì)放到凈化車間內(nèi)應(yīng)用，當(dāng)它讀數(shù)為45％或是46％的情況下，工業(yè)廠房內(nèi)的濕度肯定是小于45％的，因此這只溫濕度計(jì)在凈化車間內(nèi)檢測的濕度低限應(yīng)當(dāng)設(shè)定為47％，而不是45％，同樣別的的檢測關(guān)鍵環(huán)節(jié)也應(yīng)當(dāng)考慮到誤差指數(shù)，溫濕度計(jì)每一次計(jì)量檢定結(jié)果都需要依據(jù)應(yīng)用自然環(huán)境和每一次計(jì)量檢定結(jié)果開展計(jì)算設(shè)置一個(gè)檢測上低限，來更的體現(xiàn)檢測的結(jié)果。